超速离心法纯化病毒实验——差速离心法

发布时间:2024-11-30 05:41

禁止超速行驶,保持安全距离。 #生活知识# #安全常识# #交通安全法规#

超速离心法纯化病毒实验——差速离心法

实验方法原理不同大小和比重的粒子在沉降速度上存在差别,沉降速度差别(相差)在一个或几个数量级的粒子,可用本法分离提取。实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒无仪器、耗材差速离心机实验步骤将被分离的样品交替进行低速离心与高速(或超速)离心。差速离心适用于从组织培养液、鸡胚尿囊液或经过红细胞吸附-释放的病毒悬液中提纯病毒。在由感染细胞或组织匀浆中提取病毒时,由于与病毒大小相近的细胞亚单位及碎片的存在,提纯效果不理想。以差速离心法分离提纯病毒时,经常以低速 (2 000~3 000 r/min, 20~30 min) 及中速(10 000 r/min,20~30 min) 去除较大的宿主细胞碎片、污染的细菌及其它较大的杂质。然后,选择在 60 min 内能够沉淀 80% 以上的病毒粒子的较高速度,离心 1~2h使病毒沉淀。注意事项其他差速离心法的优点是能迅速处理大量样品,故常作为病毒精制的第一个阶段,或者用于病毒样品的浓缩和粗提。......阅读全文

超速离心法纯化病毒实验——差速离心法

实验方法原理不同大小和比重的粒子在沉降速度上存在差别,沉降速度差别(相差)在一个或几个数量级的粒子,可用本法分离提取。实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒无仪器、耗材差速离心机实验步骤将被分离的样品交替进行低速离心与高速(或超速)离心。差速离心适用于从组织培养液、鸡胚尿囊液或经过红细胞吸附-释放的病毒悬

吸附法纯化病毒实验

实验方法原理实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒凝胶材料仪器、耗材烧杯实验步骤磷酸钙凝胶:这是病毒凝胶吸附法中较为常用的凝胶,由 0. 5 mol/L CaCl2 和 0. 5mol/L Na2HPO4 溶液混合制备凝胶状沉淀物,用 0. 001mol/L 磷酸盐缓冲液悬浮,置千 4℃ 4~5

超速离心法纯化病毒实验——界面离心分离法

实验方法原理离心管内病毒悬液中的病毒和细胞碎片随其自身密度的大小而下沉或上浮到相等密度梯层中实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒蔗糖溶液仪器、耗材离心机实验步骤(1) 取浓缩后的病毒悬液 5 ml, 加入 1/5 或 1. 66/5 体积的 600 g/L 的蔗糖溶液,使其含蔗糖10%~15%, 摇匀。

吸附法纯化病毒实验_​凝胶吸附法

实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒凝胶材料仪器、耗材烧杯实验步骤磷酸钙凝胶:这是病毒凝胶吸附法中较为常用的凝胶,由 0. 5 mol/L CaCl2 和 0. 5mol/L Na2HPO4 溶液混合制备凝胶状沉淀物,用 0. 001mol/L 磷酸盐缓冲液悬浮,置千 4℃ 4~5小时使之充分沉淀后应用

超速离心法纯化病毒实验

实验方法原理不同大小和比重的粒子在沉降速度上存在差别,沉降速度差别(相差)在一个或几个数量级的粒子,可用本法分离提取。实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒无仪器、耗材差速离心机实验步骤将被分离的样品交替进行低速离心与高速(或超速)离心。差速离心适用于从组织培养液、鸡胚尿囊液或经过红细胞吸附-释

慢病毒的浓缩与纯化——超速离心沉淀法

实验概要本实验介绍了用超速离心沉淀法浓缩与纯化慢病毒的操作步骤。主要试剂1. 70%乙醇2. 20%的蔗糖溶液3. PBS缓冲液主要设备1. Ultra-clear SW28离心管2. 超净工作台3. 紫外灯4. 10ml移液管5. Beckman SW28 超速离心转头6. 高速离心机7. 50m

吸附法纯化病毒实验——红细胞吸附法

实验方法原理用于某些可与红细胞吸附的病毒的浓缩,如正粘病毒和副粘病毒,由于红细胞吸附法是特异的,故可达到浓缩并纯化的目的。实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液鸡红细胞悬液仪器、耗材烧杯水浴锅实验步骤用作吸附病毒的红细胞一般选择适宜动物的红细胞,常用的是鸡红细胞。基本步骤为:① 1%~3% 鸡

吸附法纯化病毒实验_葡聚糖柱层析法

实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒磷酸盐缓冲液仪器、耗材分光光度计实验步骤(1) 经初步纯化浓缩后的材料,通过葡聚糖 G150 或 G200 柱层析。(2) 用 0. 02~0. 15mol/L 磷酸缓冲液 (pH 7. 0~7. 6) 洗脱,洗脱时适宜流速为 2~5ml/(cm2•h) 。分部收集,

超速离心法纯化病毒实验——密度梯度离心

实验方法原理病毒的密度与细胞碎片不同,用梯度制备仪制成适宜的介质梯度如蔗糖梯度或 CsCl 密度梯度,将病毒悬液加到密度梯度的上层,进行超速离心,离心管内病毒悬液中的病毒和细胞碎片随其自身密度的大小而下沉或上浮到相等密度梯层中,吸出含有病毒的沉淀带,即可得到相当纯净的病毒。实验材料待纯化的病毒试剂、

蔗糖梯度纯化法实验

实验材料:染色质粗品试剂、试剂盒:聚碳酸酯离心管仪器、耗材:Dounce 匀浆器实验步骤:准备两种 18ml,浓度分别为 20% 和 60% 的蔗糖分离缓冲液(聚胺,水相或己二醇法的缓冲液),然后以线性形式加到一 50 ml 的聚碳酸酯离心管中,用梯度生成器形成沿离心管的密度梯度。2. 将染色质粗品

超速离心机差速离心简介

  这种方法是选择不同转速的离心,分别分离各个不同组分。例如先用低速沉降大颗粒和上清液,在高速离心上清沉降中等颗粒,最后超速离心上清沉降小颗粒。采用逐级提高离心力分离上情液的方法,把不同大小的颗粒分开。  这种方法比较简单,方便。分离的组份沉到管底,因此可以迅速浓缩所要的组份,减少体积。但回收率和纯

超速离心法纯化病毒实验——等密度梯度离心

实验方法原理离心过程中 CsCl 随离心力而下沉,形成连续梯度,上部密度小而下部密度大,离心管内病毒悬液中的病毒和细胞碎片随其密度的大小而下沉或上浮到相等密度梯层中实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒CsCl仪器、耗材离心机实验步骤在每毫升病毒悬液中,加入 CsCl 约 1 g, 混匀,4℃以 40 0

聚乙二醇-(PEG)-浓缩法及超过滤法纯化病毒实验

实验方法原理 这一方法是浓缩大量病毒悬液和初步纯化病毒的常用方法之一。 PEG 是环氧乙烷和水缩合而成的水溶性非离子型聚合物,相对分子质量为 2 000-6 000 的 PEG 多用于浓缩病毒,其中以 PEG6 000 效果最好。 PEG 浓缩法能成百倍的浓缩病毒,而且对病毒的结构和抗原性有

聚乙二醇-(PEG)-浓缩法及超过滤法纯化病毒实验1

聚乙二醇 (PEG) 浓缩法实验方法原理这一方法是浓缩大量病毒悬液和初步纯化病毒的常用方法之一。 PEG 是环氧乙烷和水缩合而成的水溶性非离子型聚合物,相对分子质量为 2 000-6 000 的 PEG 多用于浓缩病毒,其中以 PEG6 000 效果最好。 PEG 浓缩法能成百倍的浓缩病毒,而且对病

聚乙二醇-(PEG)-浓缩法及超过滤法纯化病毒实验_超过滤法

实验方法原理超过滤法是利用超滤膜将水、盐及小分子滤过,将一定大小的大分子或病毒等颗粒截住从而使后者得到浓缩的一种方法。超过滤法是浓缩大容量的病毒样品的一种非常有效的方法,浓缩的同时可达到部分纯化。实验材料待纯化的病毒试剂、试剂盒PBS仪器、耗材超滤膜实验步骤该法通常将孔径比病毒颗粒小的硝酸纤维素滤膜

DNA纯化实验——PCR清洁试剂盒纯化法

实验方法原理硅胶膜可在高盐条件下结合DNA,又可在低盐条件下与DNA分离。用于清洁目的的含DNA溶液中的引物、单核苷酸、酶、矿物油、盐离子等杂质因为没有与DNA相似的特性,所以被分离开来。 实验材料PCR产物试剂、试剂盒PCR清洁试剂盒仪器、耗材96孔DNA制备板96孔深孔板96孔V型底板实验步骤一

超速离心机的差速离心法操作

  这种方法是选择不同转速的离心,分别分离各个不同组分。例如先用低速沉降大颗粒和上清液,在高速离心上清沉降中等颗粒,最后超速离心上清沉降小颗粒。采用逐级提高离心力分离上情液的方法,把不同大小的颗粒分开。  这种方法比较简单,方便。分离的组份沉到管底,因此可以迅速浓缩所要的组份,减少体积。但回收率和纯

病毒的滴定实验——稀释法

实验步骤1.  以维持液(0.5% 水解乳蛋白Hank's 液)将病毒作连续10 倍稀释(每一稀释度换一新吸管)。2.  如选择滴定的稀释度为l0-6~10-8,则于试管架上排列8 支试管。l0-1~10-5共5 支管,每管如入1.8 毫升维持液;l0-6~10-8共3 管,每支加入4.5

DNA纯化实验——DNA凝胶回收试剂盒纯化法

DNA纯化可用于:(1)获得高纯度的DNA;(2)浓缩DNA;(3)测序、遗传信息分析等分子生物学应用。实验方法原理本试剂盒适合从各种琼脂糖凝胶中提取多至 8 μg DNA(70 bp-10 Kb),回收率为 60-85%。琼脂糖凝胶在温和的缓冲液(DE-A 溶液)中溶解,其中的保护剂能防止线状 D

痘苗病毒纯化实验

实验方法原理对于很多研究,部分纯化的病毒就足够了(进行到本实验步骤 14), 如果是纯化 MVA 病毒,则不能用胰酶消化,也不能用 CEF 细胞或 BHK-21 细胞代替 HeLa 细胞。实验材料痘苗病毒储液HeLa S3 细胞(悬浮培养)试剂、试剂盒胰酶Tris • Cl蔗糖仪器、耗材旋转

痘苗病毒纯化实验

痘苗病毒通常采用蔗糖密度梯度离心的方法纯化。纯化的病毒可用于制备痘苗病毒 DNA ,用于不允许存在感染细胞蛋白污染的研究中,同时也可以用作高滴度的病毒储液。对于大规模的纯化(至少 1 L 的培养物),最好的方法是用 HeLa 细胞悬液作为感染的对象,而不要用单层培养的细胞。内容来源于《精编分子生物学

痘苗病毒纯化实验

大规模纯化           实验方法原理对于很多研究,部分纯化的病毒就足够了(进行到本实验步骤 14), 如果是纯化 MVA 病毒,则不能用胰酶消化,也不能用 CEF 细胞

关于超速离心机的差速离心方法介绍

  超速离心机的差速离心方法是选择不同转速的离心,分别分离各个不同组分。例如先用低速沉降大颗粒和上清液,在高速离心上清沉降中等颗粒,最后超速离心上清沉降小颗粒。采用逐级提高离心力分离上情液的方法,把不同大小的颗粒分开。  超速离心机的差速离心方法比较简单,方便。分离的组份沉到管底,因此可以迅速浓缩所

染料配基层析法纯化蛋白质实验——染料配基法

染料配基层析不是真正意义的亲和层析,因为它们并不是与它们结合的蛋白质的天然配基。然而染料柱能很好地结合蛋白质,并能导致满意地纯化蛋白质。事实上,有时这种结合甚至比正常的配基更紧。染料配基柱通常是廉价和稳定的,并且具有较高的蛋白质结合容量。所以染料配基层析能作为蛋白质纯化中有价值的步骤之一。来源:《蛋

病毒中和实验_固定抗血清-稀释病毒法

实验材料已知标准的抗病毒血清 (20抗体单位 0. 1 ml)试剂、试剂盒已知阴性血清 (56℃ 30 min 灭活)宿主:敏感细胞、敏感动物、鸡胚仪器、耗材细胞培养板水浴锅细胞培养箱实验步骤(以细胞培养为例):①用细胞维持液连续 10倍稀释病毒分离物10-1~10-8);②取 0. 6ml不同浓度

病毒中和实验_固定病毒-稀释抗血清法

中和试验 (neutralization test)是在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物,使病毒与抗体相互反应,再将混合物接种到敏感的宿主体内,然后测定残存的病毒感染力的一种方法。凡是能与病毒结合,并使其失去感染力的抗体称为中和抗体。因为病毒要依赖于活的宿主系统复制增殖,因此,中和试验必须

超速离心机分类法

超速离心机又有2种分类法:(1)按用途分类:a.分析型超速离心机L.制备型超速离心机c.制备、分析两用超速离心机(2)按驱动方式分类:a.油涡轮驱动b.压缩空气驱动c.电机齿轮驱动d.变频电机直接驱动e.其他(如磁悬式等)

杆状病毒表达系统的空斑纯化法介绍

  由于在重组病毒中多角体基因被外源基因所取代,因此形成的子代病毒不含有包含体,为包含体阴性病毒。包含体阴性病毒与包含体阳性病毒(由野生型病毒形成)在平板中形成的空斑形态是不同的。因此,可在光学显微镜下,利用这一特征筛选出含外源基因的重组病毒并加以纯化[12]。这正是目前使用最普遍的有效方法。  1

慢病毒的浓缩与纯化——PEG8000浓缩法

实验概要本实验介绍了用PEG-8000浓缩法浓缩与纯化慢病毒的操作步骤。主要试剂1. NaCl2. PEG8000主要设备1. 高压灭菌锅2. 0.45μm滤头3. 高速离心机4. 低温冰箱实验步骤1. 5X PEG8000 NaCl配制称取NaCl 8.766 g; PEG8000 50g溶解在2

实验室纯水设备纯化水超滤法

实验室纯水设备水纯化一般的常见水纯化方法有:离子交换法,活性碳吸附法,微孔过滤法,超滤法和反渗透法,本篇文章小编为您介绍超滤法相关内容介绍:首先为您介绍下微孔薄膜微孔薄膜是依其孔径大小来去除颗粒,而超滤(UF)薄膜则是一个分子筛,它以尺寸为基准,让溶液通过极细微的滤膜,以达到分离溶液中不同大小分子的

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