实验动物常用物品标准操作规程

制定标准化操作规程，减少重复劳动 #生活技巧# #组织技巧# #工作流程优化#

 垫料是大、小鼠等啃齿类实验动物繁殖饲养与实验饲养中必不可少的条件之一,是一种可影响动物健康和实验结果的可控制的环境因素。它起着吸附动物的排泄物、降低笼内氨气、保持宽内干燥从而维持笼具和动物自身的清洁卫生的作用。因此,垫料的质量是保证实验动物质量的一个重要环节,也是衡量动物福利的一个重要内容。

   实验动物垫料按照夜用方法可分为接触型和非接触型两种。接触型为直接将垫料铺垫在动物笼具底部1cm厚区域,动物与垫料始终保持密切接触状态,要根据动物饲养的笼具如有 无底板或不锈钢丝网等选择适宜的垫料;非接触型垫料则不与动物身体接触,一般放置于挝 式动物笼具下方的托盘内,承接动物排泄物。实验动物主要使用接触型垫料,接触型垫料剧 齿类动物一生中接触最频繁的环境因子,也是影响实验动物质量与动物实验实验数据最关苦的环境因素。实验动物垫料通常使用吸水性良好的原料如玉米芯、锯木屑、刨花、废纸屑则成垫料等。

( 一 ) 垫料种类

1. 木质垫料

木质垫料是一种常用的、价格便宜的垫料,可分为硬质木料和软质木料,硬木和软木都可以得到木削片、木屑和刨花,其中刨花作为营巢材料比木削片更好,硬木屑作为垫料比软糊。这类垫料原料主要包括松木、杨木、泡桐等。

2. 纤维纸垫料

硬纸片和白报纸等纤维纸作垫料,吸湿性很好,价格也适当,也能较好控制氨昧,是一种较好的营巢材料 , 常剪成颗粒状或制成片状使用。

3. 植物纤维垫料

蒲草表面光洁、质地柔软、通气、组织蓬松、呈海绵状 , 吸水性高于木屑和刨花,吸氨能力略低于玉米芯和刨花,是较好的垫料材料,它具有易收集、成本低、易保存、动物适应性好等特点。 这类垫料原料还包括玉米秸秆、稻壳、芦苇等。

4. 玉米芯垫料

玉米芯是目前国际上最常用一种动物垫料,它具有来源丰富、适合动物生活、干燥性最好吸收氨的能力最强、污染程度最小、便于标准化生产等特点,但由于需要专门设备进行生产,配此在价格上要高于上述原料垫料。 

( 二 ) 垫料原料的选择

实验动物垫料材质宜选用质地松软、吸湿性强、无异味、不含重金属及芳香类、挥发性圳质,未被有毒有害物质、微生物、寄生虫污染,用无变质、腐败、霉变的原材料制作而成。对于有些含有芳香类、挥发性物质的植物,如松木等,应尽量少用;污染源附近生长的植物以及变成腐朽、霉变、虫蛀的原料不应使用。 

( 三 ) 垫料的加工

一般木质垫料如木削片、木屑和刨花等均为木材或木器加工的副产品,如在规格允许范围(刨花1～3cm长宽),不需再进行加工。植物纤维垫料和玉米芯垫料需要加工后才可以用,植物纤维垫料如蒲革和稻草通常切成1.0～1.5cm的碎段,玉米芯垫料打碎成1.0cm×0.8cm×0.04cm的颗粒,纸质纤维垫料则剪成直径为l~3cm的颗粒状。应注意的是,垫料的 破碎程度和粉尘量直接相关,要注意清除过细的带有灰尘的垫料。

( 四 ) 垫抖的消毒灭菌与贮藏

饲养动物所用的垫料必须经过灭菌处理,普通级动物使用的垫料需灭菌1次,清洁级以动物使用的垫料需先经过筛子筛去较小的粉尘(防止堵塞屏障设施内的滤材),消毒后倒(有条件的单位可消毒2次),这样能较好地防止微生物和寄生虫的污染。高温高压和射线照射灭菌是常用的消毒灭菌方法,高温高压灭菌时,120℃、30min; 射线照射灭菌法一般采用60Co射线,照射强度为 20-25KGy。 经过灭菌的垫料,其微生物控制指标如细菌总数、霉菌数、大肠杆菌等应达到一次性用品的卫生标准要求。

未灭菌的垫料在储存过程中均宜用垫板、架子等与地面隔离。垫料要保存在干燥、凉爽、 黯污染源的地方,保存期不应超过1年。试验证明,经高压灭菌法灭菌的垫料如在开放环境下消毒桶内储藏可保存5～7d。

( 五 ) 垫料的更换

量料的更换次数主要依据饲养动物的种类、大小、笼内动物数量、设施的通风换气次数、设施的清洁卫生状况、氨浓度等来确定。一般每周更换1～2次,饮水瓶漏水造成垫料潮湿时应则更换。

( 六 ) 垫料的监测

在我国实验动物有关标准中,只规定垫料应选用吸湿性好、尘埃少、无毒性、无油脂的材料须经消毒、灭菌后方可使用。日本对垫料除进行微生物检查外(一般活菌数、大肠杆菌数、真菌 ),还对氟、铅、锡、总水银、BHC、DDT、氧甲桥荼、氧桥氯四桥荼、七氯、异狄杀虫剂、二嗪农、多氯联苯、甲基多氯联苯,马拉硫磷、PCB、黄曲霉素(B1,B2,G1,G2) 等17项污染物质进行检测。欧美也有类似的规定。

( 七 ) 实验动物垫料的评价 

优良的垫料应具备吸水性强、无尘土、不利于微生物生长、不站污动物、不会引起动物皮肤输膜的创伤、易消毒、消毒前后不产生对动物有害的物质;易贮藏,无微生物与化学物质的污染,不引起变态反应,物美价廉,来源广;易进行标准化生产等特点。垫料的品质检验主要是对其化学性质即有无农药、杀虫剂和化学异物等污染情况的评价;物理性质包括颗粒的均匀性、吸水性等;微生物检验即有无影响动物质量的微生物或寄生虫污染等。

1. 吸水性试验

将一定重量的垫料用孔径为2.0mm×2.0mm 的尼龙网包扎后置于水中,一定时间后取出帽子网架上,看不到滴水后称重,以每克垫料吸水克数评定垫料吸水性能。

2. 吸氨性试验

用适合的塑料袋套住笼子,吸收管的橡皮管深入笼子中心点,扎住袋口,以0.5l/min的流量集气2min,依纳氏比色法在分光光度计测定并计算采集样品的氨浓度。当动物饲养笼内氨 放度达到5ppm时,就开始影响大、小鼠的呼吸系统,氨浓度超过25ppm时,可引起大鼠肺部明显病变。如果垫料的氨吸收性能差、垫料更换周期长,笼子底部氨浓度可达到300ppm,这会严重影响动物健康。

3. 保温性试验

用动物巢内温度以及动物离巢后5min、10min、15min后的空巢余温来评定垫料的保温性。 

4. 适应性试验

在不同的动物盒子里放不同的垫料,盒子之间保持互相相通状况,这样小鼠可自由的进入任何一个盒子,根据小鼠在某种垫料的盒子里停留和睡眠时间的长短,可以推断小鼠喜欢哪一 种量料。这是一种动物主动性选择试验,在研究小鼠对木质垫料的适应性试验中,发现小鼠最喜欢白杨垫料,其次是云杉、白桦,没有小鼠选择松树垫料。

5. 生长繁殖试验

评价垫料对实验动物生长繁殖的影响,一般要连续观察3胎生产情况。需要观察的指标包括交配分娩间隔、产后母体重量、生产率、产仔数、出生重、1～3周的仔重和存活率、离乳存活率、性别比例等。

6. 一般毒性安全试验

选择垫料除进行品质鉴定外,还需考虑对实验的影响,如进行毒性和致癌性试验等,垫料里的污染物进入实验动物的微环境会影响实验动物的正常生理功能,进而影响实验结果。一般进行垫料水浸出物、醇浸出物、磁浸出物的急性毒性试验。用这几种浸出物对实验动物进行灌胃、经眼、经皮等试验,观察动物状态,确定垫料对实验动物的毒性作用。

垫料原材料本身可能含有影响动物健康的物质。人们很早就发现广泛使用的松木和到 垫料含有的特殊气味能引起人和动物发生免疫介导的过敏和炎症反应、哮喘和其他呼吸道疾病,还能造成气管和支气管上皮细胞脱落、坏死等,体外和体内动物实验研究发现,松木和雪松 垫料提取物不但诱导动物肝微粒酶,而且有细胞毒性及潜在的致癌性等。因此,在研究或开发 实验动物垫料时,必须进行垫料的安全性评价试验。

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